ماهو PCR

الموضوع في 'العلوم العامة والبرامج العلمية' بواسطة xaxaxa, بتاريخ ‏مارس 13, 2010.

  1. xaxaxa

    xaxaxa Member

    إنضم إلينا في:
    ‏يناير 19, 2007
    المشاركات:
    146
    الإعجابات المتلقاة:
    13
    نقاط الجوائز:
    18


    اتمنى من احد ان يقول لي طريقة"pcr اختصار


    وجدت مواضيع علمية كثيرة لكن اريدها بالعامي اذا احد يستطيع وله كل الشكر ​
     
  2. DNA PROFESSOR

    DNA PROFESSOR مشرف بالجامعة إداري

    إنضم إلينا في:
    ‏نوفمبر 13, 2008
    المشاركات:
    899
    الإعجابات المتلقاة:
    402
    نقاط الجوائز:
    78
    الوظيفة:
    بكالوريوس العلوم الخاص قسم الكيمياء
    مكان الإقامة:
    مـــــــصــــــــر
    polymerase chain reaction PCR
    تعرف هذه التقنية بالتفاعل السلسلي لإنزيم بلمرة الحامض النووي DNA وتعتمد فكرة هذا التفاعل على إمكانية تضخيم Amplification وإكثار وعمل ملايين النسخ من أي حامض نووي دون الحاجة لعزلة، حيث يمكن لهذا التفاعل أن ينتج 100 مليار جزيء من الـDNA من جزيء واحد فقط في لحظة البدء وخلال 6 ساعات فقط.

    متطلبات تقنية PCR

    • الحامض النووي المزدوج Double Stranded المحتوي على الجزء المطلوب نسخه.

    • بادئ محضر صناعيا معروف نظام تعاقبه Oligannucleotid primer ويتكون من 20 نيوكليوتيدة .
    • أنزيم بلمرة خاص مقاوم للحرارة ، ونجح الباحثون في الحصول على هذا الإنزيم وعزله من البكتريا المحبة للحرارة العالية المعروفة باسم Thermus aquatic


    خطوات تنقية الـ PCR:

    1) يتم فصل الحلزون المزدوج لشريطي الحامض النووي إلى خيط مفرد عن طريق عملية الدنترة (المسخ) Denaturation بتسخينه إلى درجة حرارة من 94-95مْ.
    2) يضاف البادئ المعروف تسلسله النووي إلى الحامض النووي المفرد و تتم بعد ذلك عملية تبريد وتقوية Annealing بخفض درجة الحرارة إلى 37مْ -65مْ اعتمادا على مدى التطابق بين البادئ المستخدم والحامض النووي.
    3) يتم استطالة Extension للحامض النووي عند درجة 70-75مْ باستخدام الإنزيم المقاوم للحرارة.
    يتم تكرار الثلاث خطوات من التسخين وتقوية واستطالة للحامض النووي باستخدام نفس الإنزيم السابق حتى يتم الحصول في النهاية على Unit length double stranded DNA .

    وحاليا يستخدم جهاز ذاتي يعمل بمضاعفة جزيئات حامض DNA ويعرف باسم Automated Thermal Cycler وهو يستخدم الآن على نطاق واسع في معامل الأبحاث. وفي هذا الجهاز ترتفع درجة الحرارة آليا لإتمام عملية فك الشريط الحلزوني ثم تنخفض آليا لإتمام بناء الشريط موضح أدناه


    مشاهدة المرفق 31467

    An older model three-temperature thermal cycler for PCR

    مشاهدة المرفق 31468

    An old thermal cycler for PCR

    تطبيقات PCR :

    لتقنية PCR تطبيقات كثيرة في مجال أبحاث الحمض النووي (DNA ) و الوراثة ومنها :

    1. الكشف عن الطفرات الوراثية : وذلك عن طريق وضع بريمر خاص للطفرة لتكثير الجين الخاص بها . ومنه نقوم بمعرفة المرض إذا كان على زوجين الكروموسومات أو على احدهما ( allele ) .

    2. تعين البصمة الوراثية .

    3. الكشف عن الفيروسات : وهذه الطريق هي الأدق في تحديد نوع وجنس الفيروس وكميته.

    4. هو العنصر الأهم في عملية التجميع الجيني ( Recombinant الحمض النووي (DNA ) ) : حيث نقوم بتكثير الجين المراد إدخاله على البلازمد أو الحمض النووي (DNA ) المضيف .

    5. استخدامه في تغير نهايات الجين لتصبح متوافقة مع إنزيمات القطع ( Restriction enzyme ) .

    6. هو العملية الأساس في تحديد تتابع القواعد النيتروجينية في الحمض النووي (DNA ) ( الحمض النووي (DNA ) Sequencer ) .

    7. معرفة طول الحمض النووي (DNA ) .

    8. تقنية الحمض النووي (DNA ) المكمل ( cالحمض النووي (DNA ) ) .

    9. تحديد الجين المطلوب من خليط من الجينات .

    10. يستخدم في تقنية (microarrays ).

    11. في مشروع الخارطة الجينية البشرية (human genome project ) .

    12. الساوثرين بلوت (southern plot ) .

    13. تقنية ارتباط الحمض النووي (DNA ) – بروتين ( الحمض النووي (DNA ) -Protein Interaction ) .

    14. في مجال الطب الشرعي ( اختبار الأمومة ، حالات الاغتصاب ، تحديد الهوية ... الخ ) .

     
    ma95 ،gln psdk ،estifa mohammed و 2آخرون معجبون بهذا.
  3. Abu_Omar

    Abu_Omar مشرف عام إداري

    إنضم إلينا في:
    ‏مايو 30, 2008
    المشاركات:
    1,909
    الإعجابات المتلقاة:
    2,227
    نقاط الجوائز:
    128
    الجنس:
    ذكر
    *********
     
  4. D0uD0u

    D0uD0u Active Member

    إنضم إلينا في:
    ‏سبتمبر 10, 2008
    المشاركات:
    481
    الإعجابات المتلقاة:
    141
    نقاط الجوائز:
    43
    مكان الإقامة:
    مصر
    بالعامى :) هو تفاعل يعمل replication لل دى ان ايه بتاعك. بمعنى عندك دى ان ايه dna وعايز تعمل منه نسخ كتيرة سواء كان الهدف تحليل فى معمل أو الهدف بحثى. الدى ان ايه اصلا ييتكون من شريطين ماسكين فى بعض فى شكل لولبى double stranded helix ووحدته اسمها nucleotide وهى 4 انواع A C G T . الشريطين دول متكاملين يعنى لو شريط فيه A حيبقى ماسك فيه فى الشريط التانى T , والC قدامها G , علشان اعمل التفاعل حاحتاج افك الشريطين من بعض وأضبف ال nucleotides و الانزيم المسئول عن اتمام التفاعل ، كل شريط من الشريطين اللى اتفكوا حيبقى اساس لدى ان ايه جديد لأن حاضيف له nucleotides تكون أساس للشريط التانى اللى ماسك فيه وبالتالى انتهى بنسختين بدل نسخة. بعد كده ال 2 دى ان ايه يتفكوا ويكونوا اساس ل 2 تانيين فيبقى عندى 4 وهكذا... يستمر التضاعف لغاية ما احصل على نسخ كتير. علشان تعمل التفاعل حتحتاج:
    1- ال ادى ان ايه الى حتعمل عليه التفاعل بنسميه Template
    2- dNTPs (ال nucleotides)
    3- الانزيم واسمه دى ان ايه بوليميراز dna polymerase ومنه نوعين اساسيين مستخدمين فى المعامل Taq polymerse و Pfu polymerase الفرق بينهم انهم مسخلصين من كائنين مختلفين، والدقة لأن pfu بيقدر يصلح الأخطاء وعلشان كده غالى
    4- primers ودى عبارة عن oligonucleotides أو جزء صغير من الشريط الموازى معمولة جاهزةوتروح تمسك فى واحد من الشريطين لما يتفك وبعدين يجى الانزيم ويكمل عليها ويضيف ال nucleotides الموازية االلى بعدها ودول لازم اضيفهم لأن الانزيم المستخدم لا يستطيع البدء من العدم (ما يقدرش يعمل de novo synthesis) ولكن بيحتاج حاجة يكمل عليها.
    5 -buffer لضبطPH التفاعل
    بتحط الخمسة مع بعض بنسب معينة مع ماء مقطر فى انبوبة صغيرة وتحطها فى الجهاز اللى اسمه Thermocycler . وتضبط البرنامج بتاع الجهاز. الجهاز ده حيغير الحرارة كذا مرة بنسب محسوبة ، علشان يسمح ان ال دى ان ايه الأصلى يتفك وبعدين علشان يسمح بتصنيع الدى ان ايه الجديد .. الخ ولما الجهاز بيخلص بيكون عندك الدى ان ايه مركز فتقدر تقوم عليه بابحاثك.
     
    estifa mohammed, ma95, علاء* و 1 شخص آخر معجبون بهذا.
  5. xaxaxa

    xaxaxa Member

    إنضم إلينا في:
    ‏يناير 19, 2007
    المشاركات:
    146
    الإعجابات المتلقاة:
    13
    نقاط الجوائز:
    18
    شكرا لك يابرفسور DNA على التوضيح والتفصيل ........شرح ولا أحلى

    شكرا لك على الشرح المكمل واثراءك للموضوع

    وأعرف اني زودتها شوية وبقية السؤال كالتالي :


    طيب ما علاقة RAPD بــــ PCR يكون قبله أو بعدة وكيف يعمل RAPD


    مع الشكر
     
    أعجب بهذه المشاركة sumerland137
  6. D0uD0u

    D0uD0u Active Member

    إنضم إلينا في:
    ‏سبتمبر 10, 2008
    المشاركات:
    481
    الإعجابات المتلقاة:
    141
    نقاط الجوائز:
    43
    مكان الإقامة:
    مصر
    ال RAPD هو نوع من انواع ال PCR (نوغ وبالتالى لا ينطبق عليه قبله وبعده). علشان اوضح لازم يكون خلفية اكتر فى البيولوجيا الجزئية بس حاحاول اوضح. لما بنيجى نشتغل PCR عادى بيكون عندنا معلومات كاملة عن ال template dna بتاعنا بمعنى اننا بنبقى عارفين ال nucleotide sequence بتاعه (عارفين كل مكان فيه اى nucleotide من الأربعة) وبالتالى باصمم ال primers اللى ذكرتهم فوق على هذا الاساس. يعنى مثلا لو انا عايزة أعمل replication لجزء معين من ال dna باعمل 2 primers يكونوا موازيين للمنطقتين المحيطين للجزء اللى أنا عايزة أكبره ويكونوا فى اتجاه عكس بعض بحيث ان الانزيم يكمل من الناحيتين لغاية ما يتقابلوا
    ======> dna i want to amplify <=======
    السهمين عبارة عن ال primers وبناء عليه لازم اكون عارفة المنطقتين دول فيهم اى nucleotides فى الدى ان ايه الاصلى علشان اقدر اصمم primers مكملين لهم بالضبط
    الفرق فى ال RAPD انى معنديش معلومات عن ال دى ان ايه الأصلى بتاعى وبالتالى ما بصممش primers لكن بأختار primers عشوائية.. وده عادة بيستخدم مع الكائنات اللى ما عنديش ال genomic sequence بتاعها كامل وغالبا لأهداف phylogenetic
    بمعنى انى باستخدم مجموعة من ال oligos العشوائية اللى ممكن تمسك فى اى مكان فى الدى ان اى بتاعى (وممكن لا - انت وحظك) ولما أعمل replication اقدر استخدم ده فى معرفة ال sequence بتاع المنطقة اللى حصل لها replication
     
    أعجب بهذه المشاركة علاء*
  7. xaxaxa

    xaxaxa Member

    إنضم إلينا في:
    ‏يناير 19, 2007
    المشاركات:
    146
    الإعجابات المتلقاة:
    13
    نقاط الجوائز:
    18
    مشكور على الايضاح
    بارك الله في جهودك
     
    أعجب بهذه المشاركة sumerland137
  8. AboJim

    AboJim مشرف بكلية العلوم سلسبيل المنتدى إداري

    إنضم إلينا في:
    ‏مارس 10, 2006
    المشاركات:
    5,109
    الإعجابات المتلقاة:
    1,757
    نقاط الجوائز:
    128
    الجنس:
    ذكر
    الوظيفة:
    صيدلي دكتور في الكيمياء الصيدلية
    مكان الإقامة:
    الولايات المتحدة بلد الأصل: مصر
    أنا أحببت أن أضيف أني استخدم هذه التقنية لعمل طفرات في الجينات التي أريدها (لن أدخل في تفاصيل)
    يمكن أن تجعل هذا الاستخدام رقم 15

    جزاكم الله خيرا على المعلومات الرائعة و طرق الشرح المميزة

    و جعلكم الله ممن يتعلم العلم و يعلمه
     
    ma95 و sumerland137 معجبون بهذا.
  9. sumerland137

    sumerland137 مشرف بالجامعة - فهــد الرافدين إداري

    إنضم إلينا في:
    ‏أغسطس 31, 2009
    المشاركات:
    4,178
    الإعجابات المتلقاة:
    2,966
    نقاط الجوائز:
    128
    الجنس:
    ذكر
    الوظيفة:
    Chief researchers, PhD, Prof Mater Sci
    مكان الإقامة:
    أرض الرافدين
    انا سعيد جا بهذا الموضوع للمشاركة الرائعة للاخوان
    وسعيد جدا لمشاركة الأخ AboJim فحاله دائما مشغول بالتضحية بوقته بتلبية طلبات الابحاث
    لذلك انا سعيد انه وجد فسحة من الوقت ومساحة تفاعلية ربما تبعد عنه بعض الروتين
    تحياتي للاخوان جميعا
     
    ma95 و علاء* معجبون بهذا.
  10. xaxaxa

    xaxaxa Member

    إنضم إلينا في:
    ‏يناير 19, 2007
    المشاركات:
    146
    الإعجابات المتلقاة:
    13
    نقاط الجوائز:
    18
    استفسارات اذا كان لكم متسع من الوقت

    حملت كثيرا من العروض وملفات الكتب الالكترونية لشرح RAPD ولكني لم استطع فهم كل نقطة بسبب اللغة

    هل من الممكن ان توضحها لي ؟ وهل نبدأ من البداية (جميع خطوات PCR ثم الجيل ؟ وكيف تفهم المعلومات بصورة الجيل؟

    2..jpg


    وهذا رابط لشرح فقط بالصورة لكن لم افهم جزئياته بالضبط


    واعتذر اخيراً لكونه شيء جديد علي كلياً

    شكراً للجميع
     
    أعجب بهذه المشاركة sumerland137
  11. sadalla2000

    sadalla2000 Active Member

    إنضم إلينا في:
    ‏مارس 23, 2008
    المشاركات:
    644
    الإعجابات المتلقاة:
    45
    نقاط الجوائز:
    43
    السلام عليكم
    [COLOR="red"]تعقيبا على ال PCR and RAPD[/COLOR]
    تحياتى للجميع على هذة المواضيع القيمة و التى تعتبر جديدة و تحتاج الى فهم دقيق من جميع الجوانب خاصة توضيح الاجراء العملى بدقة مع فهم المواد و الاجهزة المختلفة المستخدمة فى هذا الجراء وايضا مع التركيز على النتائج و تحليلها على ال Gel Electrophoresis مع توضيح معنى المصطلحات المستخدمة كال Anamorphic and Polymorphic و مع توضيح مصطلح ال Diversity in plants .
    اتمنى على الاخوة الذين عملوا فى هذا المجال و قدموا مشاركاتهم فى التوضيح ان يقدموا توضيحات اكثر و باستفاضة بالتفاصييل حتى تعم الفائدة للجميع و يستطيع الواحد الفهم عند قراءة اى بحث يتعلق بال RAPD
     
    علاء* و sumerland137 معجبون بهذا.
  12. 333Elham

    333Elham New Member

    إنضم إلينا في:
    ‏ديسمبر 11, 2012
    المشاركات:
    17
    الإعجابات المتلقاة:
    2
    نقاط الجوائز:
    3
    الجنس:
    أنثى
    السلام عليكم عندي استفسار عن ثلاث كلمات وهي knockdown and knockout knock in
    ما هي مناسبة هذا السؤال وماعلاقته بالموضوع ؟:unsure: د. سعد
     
  13. 333Elham

    333Elham New Member

    إنضم إلينا في:
    ‏ديسمبر 11, 2012
    المشاركات:
    17
    الإعجابات المتلقاة:
    2
    نقاط الجوائز:
    3
    الجنس:
    أنثى
    لانه الموضوع عن جهاز يستخدم في الجيناتكس وأنا في بشتغل في لاب جيناتكس ومرت هذه المصطلحات علي وحبيت اسأل عن معناها فقط
     
  14. Totah

    Totah New Member

    إنضم إلينا في:
    ‏يونيو 2, 2013
    المشاركات:
    10
    الإعجابات المتلقاة:
    0
    نقاط الجوائز:
    1
    شكرا
     
  15. سهيرعزيز

    سهيرعزيز New Member

    إنضم إلينا في:
    ‏فبراير 24, 2014
    المشاركات:
    1
    الإعجابات المتلقاة:
    0
    نقاط الجوائز:
    1
    الجنس:
    أنثى
    الوظيفة:
    محللة محتبر انسجة
    مكان الإقامة:
    بغداد
    الله ييباااركم فيكم جميعا على الشرح الحلو
    ربي ينووورلكم حيااتكم ياارب اكثر واكثر
     
  16. biology2014

    biology2014 New Member

    إنضم إلينا في:
    ‏ابريل 3, 2014
    المشاركات:
    2
    الإعجابات المتلقاة:
    1
    نقاط الجوائز:
    1
    الجنس:
    ذكر
    السلام عليكم
    هل من الممكن أن أحصل شرح التقنية كاملة وباللغة العربية لأن المرفقات لاتفتح عندي وكذلك أنا بحاجة لهذا الموضوع كوني طالب دكتوراه ومحتاجه جدا
    بارك الله فيكم
     

مشاركة هذه الصفحة